曼地亚红豆杉(Taxus media)是以欧洲红豆杉(T.baccata)为父本、东北红豆杉(T.cuspidata)为母本的天然杂交种，又称杂种紫杉，其紫杉醇含量高且稳定，为0．03%～0．06%，是中国红豆杉品种含量的8～10倍，可全株利用，因此，探索易于生产应用的曼地亚红豆杉组织培养育苗技术体系的意义就显得尤为重大。
 
　　1  材料与方法
　　1．1试验材料
    试验用苗为四川农业大学都江堰分校实习苗圃内的5年生曼地亚红豆杉扦插苗。于7月中旬采其当年生枝上带芽茎段为外植体，接种于简化培养基上诱导侧芽萌发，萌发侧芽经壮苗培养后进行生根培养。
    初代培养培养基为筛选出的MS+6- BA0．05mg/L+NAAO．5mg/L，并以自来水、凉开水代替蒸馏水，市售普通白糖代替分析纯蔗糖，半量琼脂的半固体培养基进行培养基的简化培养；以自然光照代替灯光培养进行培养条件的简化。
    组培得到无根苗，采用以蛭石为基质的瓶外培养法替代琼脂培养基的组培生根，促根剂采用 IBA 1000mg/L速浸30s。同时以WPM+6- BA0．05+NAA1．0的琼脂培养基生根培养为对照。
　　1．2试验方法
    接种后，将灯光培养的培养瓶置于培养箱内培养，光照强度1500～2000lx，光照时间12h/d，温度为25±1℃。自然光照培养的置于窗台上培养。30d后统计发芽率。
    萌发后的侧芽经壮苗培养后，将生长健壮、苗高2cm以上的无根苗从培养瓶中取出，洗净基部培养基，用促根剂处理后插入经高压灭菌后的蛭石上。扦插后置于室内，在自然光照下培养，并经常喷水保湿，3个月后统计生根率。
 
　　2结果与分析
　　2．1初代培养
    接种30d后，采用简化培养方法进行的初代培养曼地亚红豆杉的侧芽萌发情况见表1。
表1  曼地亚红豆杉简化培养发芽情况
培养基 发芽率/%
基本培养基+蒸馏水+白糖+灯光培养 64．29%a
基本培养基+自来水+蔗糖+灯光培养 0．0%c
基本培养基+凉开水+蔗糖+灯光培养 65．65%a
基本培养基+蒸馏水+蔗糖+自然光照 34．62%b
基本培养基+蒸馏水+蔗糖+灯光培养(CK) 68．97%a

注：表中标字母为Duncon新复极差分析结果显著性99%
    白糖代替蔗糖  采用白糖代替分析纯蔗糖对外植体的萌芽率没有显著影响，萌芽率达到64．29%。这说明，市售白糖可以作为曼地亚红豆杉初代培养的碳源。且可使培养基成本降低20．9%。
    自来水、凉开水代替蒸馏水  试验中，采用自来水培养基上的外植体全部变褐死亡，萌芽率为0。这可能是因本地自来水的水质过硬，某些元素含量过高，而不适宜曼地亚红豆杉外植体生长所致。采用凉开水配制的培养基，曼地亚红豆杉能够正常生长萌发，萌芽率为65．65%，与采用蒸馏水的对照无显著差异。这是由于自来水烧开时，水中的Ca2+、Mg2+等离子沉淀析出，水质硬度降低而不致对外植体的生长产生影响。采用凉开水可降低成本6．1%，是降低曼地亚红豆杉组培成本的可行方法。
    自然光照代替灯光培养  组织培养通常采用灯光作为培养物生长的能源，但高昂的电费势必成为组织培养技术产业化的障碍。用自然光照代替灯光培养，芽的萌发率为34．62%，约为灯光培养的1/2，但萌发芽的生长情况无明显差异。本试验初代培养的培养容器为平底试管，且每10支束成一捆进行培养。由于试管壁会降低光照强度，加之试管间相互紧靠，使中间试管的光照强度较弱，因此影响了芽的萌动。可见，采用自然光照代替灯光进行曼地亚红豆杉组织培养，尚需对培养容器、培养方法以及培养室的采光条件做进一步的研究。
　　2．2生根培养的简化
    曼地亚红豆杉组培无根苗生根速度慢，生根率较低，以WPM+6-BA0．05+NAA1．0的琼脂培养基进行生根培养的生根率为27．78%，瓶外生根的生根率为58．33%。瓶外生根的生根率约是瓶内的2倍，且得到的全苗茎基部愈伤组织小，有利于移栽成活。同时，蛭石价格低廉，可反复利用，使培养基成本降低。瓶外生根是在自然条件下进行的，省去了无菌操作环节，减少了灯光培养成本，得到的全苗生长到一定高度后即可直接用于移栽，减除了炼苗过程，简化了生产流程。
　  3  小结
　　3．1  采用市售白糖和凉开水代替蔗糖和蒸馏水，不仅不会影响曼地亚红豆杉初代培养外植体的萌芽率，且可降低成本，简化生产工艺。
　　3．2采用自然光照代替灯光培养必须有适宜的培养容器和方法，以及采光条件良好的培养室，并且只能在光照充足的季节里进行。
　　3．3用IBA处理30s后以蛭石作基质代替琼脂培养基进行瓶外生根，生根率更高，且可大幅度降低培养基成本，简化生产流程，提高生根苗质量。http://www.sdtshds.com